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UV紫外分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)如何?

更新時(shí)間:2017-07-24      點(diǎn)擊次數(shù):1250
    由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了zui大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),顆粒的干擾相對(duì)較小,結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低,或者過(guò)高(超過(guò)UV紫外分光光度計(jì)的測(cè)試范圍)。zui后是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負(fù)值;混合液不能存在氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品,否則濃度差異太大。反應(yīng)后的顏色是有一定的半衰期,所以每種比色法都列出了反應(yīng)測(cè)試時(shí)間,UV紫外分光光度計(jì)所有的樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)樣品),都必須在此時(shí)間內(nèi)測(cè)試。時(shí)間過(guò)長(zhǎng),得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應(yīng)溫度、溶液PH值等都是影響實(shí)驗(yàn)的重要原因。
 
    比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。UV紫外分光光度計(jì)根據(jù)不同的測(cè)量體積,有比色杯和毛細(xì)比色杯等。一般測(cè)試核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測(cè)定。因?yàn)榉磻?yīng)中的染料能讓石英和玻璃著色,所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測(cè)試樣品。在測(cè)試時(shí),離子濃度太高,也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素,由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,尤其是核酸樣品,甚至出現(xiàn)負(fù)值,混合液不能存在氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈,必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致。

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